12孔固相萃取仪在中草药中黄曲霉毒素检测中的应用

12孔固相萃取仪在中草药中黄曲霉毒素检测中的应用
为进一步加强中草药的质量控制，国家药典委委员会有关单位和专家对黄曲霉毒素、重金属及有害元素、农药残留量等有害物质的控制方法、限度值以及重点品种进行试验研究，在2010年版《中国药典》的基础上，进一步增加中药的安全性指标控制项目，尤其是加强对中药材中重金属及有害元素、黄曲霉毒素、农药残留量的控制。其中关于黄曲霉毒素限量标准：对《中国药典》收载的柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、肉豆蔻、决明子、远志、薏苡仁、大枣、地龙、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味药材及其饮片品种项下增加“黄曲霉毒素”检查项目，限度为“黄曲霉毒素B1不得过5μg/kg；黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2总量不得过10μg/kg”。
黄曲霉毒素检测方法如下：
1.       提取：取样品粉末15g，过二号筛，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，加入70%甲醇溶液75 mL，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分），离心处理5分钟（离心速度2500转/分），精密量取上清液15 mL，置于50 mL离心管中，用水稀释，漩涡振荡器混匀，用溶剂过滤器配合无油隔膜真空泵进行过滤，使用滤膜孔径为0.45 µm。
2.       萃取：使用固相萃取装置配合无油隔膜真空泵萃取样品，使用3ml免疫亲和柱。
a．将固相萃取柱安装在固相萃取仪的阀门上，准确移取15.0 mL样品提取液注入小柱，调节真空泵的压力使溶液以约6 mL /min流速缓慢通过免疫亲和柱，随后调节阀门，使液体以1-2 d/s的速度流出；
b. 用10 mL水淋洗免疫亲和柱两次，弃去全部流出液；
c. 再用1. 0 mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 mL/min-2 mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用，流速为1 d/s。
3.       测定：
高效液相色谱条件：
色谱柱：Ultimate® XB-C18，5 μm， 4.6×150 mm
流动相：甲醇 : 乙腈 : 水（40 : 18 : 42）
流速：0. 8 mL/min
荧光检测器激发波长365 nm, 发射波长445 nm
a．碘溶液柱后衍生化法
衍生溶液：0. 05％碘溶液 （称取碘0.5g，加入甲醇100 mL使其溶解，用水稀释至1000 mL）
衍生溶液流速：0. 3 mL/min
反应管温度：700℃
反应时间：1 min
b．光化学衍生法：光化学衍生器（254 nm）。
4.       定量
精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1. 0 µg/mL、0.3 µg/ mL、1.0 µg/ mL、 0.3 µg/ mL），置于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1 mL，置于25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
分别精密吸取上述混合对照品溶液5 µL、10 µL、15 µL、20 µL、25 µL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另吸供试品溶液20～25µl，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的量。
    取样品洗脱液1. 0 mL加入重蒸馏水定容至2. 0 mL，用进样器吸取100 μL注人高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰高或峰面积）。经过与黄曲霉毒素标准溶液谱图比较响应值得到试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的浓度。
我公司用于此类分析的仪器：
一．USE系列固相萃取仪
二．UVS系列漩涡混匀器
三．固相萃取柱